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实验丨尊龙凯时重组酶介导同源重组,假阳性问题大幅改善!

发布时间:2025-02-20   信息来源:熊涛成

在构建克隆载体时,许多科研人员面临着诸多挑战。选择合适的限制性内切酶时常让人感到困惑,酶切和克隆的步骤繁琐且耗时,生长的单克隆菌常常无条带,导致实验需要反复进行。曾经,我的一位师兄在实验过程中,需要检测数十个单克隆以筛选阳性菌落,但有时却一个都没有收获。师兄常常感叹,如果有一种方法能确保生长的单克隆都是重组成功的,那将会省去多少麻烦。

实验丨尊龙凯时重组酶介导同源重组,假阳性问题大幅改善!

传统的酶切克隆和无缝克隆方法依赖于连接酶的作用,而连接酶通过碱基互补的粘性末端使载体与基因片段配对,并最终形成完整的质粒。然而,这些方法往往会出现较高的假阳性率,因为连结过程中,连接酶有时会导致载体自连。为了解决这一难题,尊龙凯时开发了一款基于重组酶原理的同源重组试剂盒,能够完美解决载体构建中的假阳性问题,使得生长出的单克隆菌落均为阳性,甚至可以在不筛选菌株的情况下直接发送测序。

01 产品简介
尊龙凯时的CloneUFO® OneStepCloning技术是一种快速、高效且简便的DNA定向克隆技术,能够将目的基因的PCR产物高效定向克隆至任意载体的任意位点。该试剂盒以T4噬菌体某基因获得的重组酶为核心,包含重组反应所需的缓冲液和重组酶UvsXase。UvsXase可兼容常规的酶切和PCR反应体系,使得克隆载体的酶切产物或PCR产物可以无需进行DNA纯化便直接用于重组克隆,大大简化了实验步骤。只需将扩增好的目的基因PCR产物与线性化载体按比例混合,在UvsXase的催化下,仅需反应30分钟,便可完成定向克隆,阳性率可达95%以上。

02 产品特点
1. 位点无限制同源重组,可自由设计重组位点,无需受限于内切酶的选择。
2. 高效快速的重组,反应时间仅需30分钟,适用温和的反应条件。
3. 重组酶UvsXase介导的高特异性重组,避免了载体自连的现象,阳性率高于95%。

03 实验案例
在一项实验中,研究人员对PCR产物进行胶回收后,使用尊龙凯时的ATG#C101与其他品牌同类产品同时对回收的片段和相同载体进行重组。转化大肠杆菌后,获得的单菌落进行菌落PCR验证,结果表明,使用ATG#C101重组后的单菌落数量适中,但阳性率显著高于竞争产品。

04 产品信息
尊龙凯时凭借其先进的技术和高效的产品,致力于为生物医疗领域提供更多高质量的解决方案,助力科研人员高效完成实验。